本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的一氧化氮(NO)代謝產(chǎn)物濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于血管舒張、氧化應(yīng)激及免疫炎癥研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠一氧化氮(NO)elisa試劑盒 | 英文名稱 | NO ELISA Kit |
貨號(hào) | CS-0610E | 規(guī)格 | 48T/96T |
保存 | 避光保存 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
核心原理:

??固相化?:微孔板預(yù)先包被抗 NO 代謝產(chǎn)物特異性抗體。
?結(jié)合?:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,NO 相關(guān)產(chǎn)物被固相抗體特異性捕獲。
?檢測(cè)?:加入標(biāo)記的二抗和 HRP 標(biāo)記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
?測(cè)定?:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。?
樣本要求:

1. 樣本類型與處理
?血清?:使用無(wú)熱原/內(nèi)毒素試管采集,避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清,-20℃保存,避免反復(fù)凍融。
?血漿?:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,離心后取上清。
?細(xì)胞上清?:1000×g離心10分鐘去除顆粒,-70℃保存。
?組織勻漿?:生理鹽水勻漿后離心取上清,-20℃保存。
2. 注意事項(xiàng)
樣本中禁止添加NaN3,以免抑制HRP活性。
細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng),建議設(shè)復(fù)孔。
操作步驟:

1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。?
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋:取6管標(biāo)準(zhǔn)品,按說(shuō)明書稀釋至0.156-10 ng/mL。
2. 實(shí)驗(yàn)流程
?加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?:每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍(lán)變黃)。?
?檢測(cè)?:450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
關(guān)鍵提示
顯色底物避光保存,混合后應(yīng)為無(wú)色。
終止液加入順序需與顯色一致,充分混勻避免綠色殘留。
使用封板膜防止蒸發(fā),確保孵育溫度穩(wěn)定。
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